血细胞分析仪的四种检测方法以及根据检测方法如何选用试剂

　　三分类血液分析仪的检测法

　　1多角度激光偏振光散射检测法

　　采用这种技术的仪器使用鞘流液将标本血稀释，稀释后白细胞的内部结构近似于自然状态，只有嗜碱性细胞由于其吸湿的特性而使细胞结构有轻微改变。红细胞内的血红蛋白在高渗透压的作用下．从细胞中分离出来。而鞘流的水分则进入红细胞内．使细胞膜结构仍然完整，它与鞘流的折光系数相同，不影响白细胞的检测。仪器同时从四个角度来检测通过激光束的细胞所产生的散射光，因为细胞大小、折射指数、核形、核浆比率以及颗粒性质等，均可影响在不同角度测得的散射光量。

　　2 电阻抗和射频电导联合检测法

　　这方法是分别采用四个检测系统来检测不同类型的细胞① 淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞检测系统：在细胞悬浮淮中加入溶血剂使红细胞溶解，而使白细胞保持完整，细胞浆及核形态近似于生理状态，当这些细胞通过检测系统时，对白细胞进行电阻抗法和射频电导法的联合检测，结果将细胞分成淋巴细胞、单核细和中性粒细胞三个群体。② 嗜酸性细胞和嗜碱性细胞两种检测系统：在细胞悬浮液中加入特殊的溶血剂，除嗜酸性细胞和嗜碱性细胞外，其他细胞均被溶解或萎缩．再对保持完整的嗜酸性细胞或嗜碱性细胞进行计数。③幼稚细胞检测系统：在细胞悬浮液中加入硫化氨基酸，由于占位不同，结合在幼稚细胞的氨基酸比成熟细胞多．且对溶血剂有抵抗作用，当加入溶血剂时．成熟细胞被溶解，只保留着可能存在的幼稚细胞用来计数。

　　3电阻抗、高频电导及激光散射联合检测法即库尔特公司的VCS技术．根据流体力学的原理，应用鞘流技术使溶血后剩余的白细胞和网织红细胞单个通过检测器，接受VCS三种技术的同时检测，完成白细胞分类过程。

　　4 光散射和细胞化学染色联合检测法

　　利用光散射的原理计数血细胞，因细胞表面结构不同，在不同角度上散射光有差别，有助于对白细胞的区分。白细胞化学染色即是在稀释液中加入过氧化酶(MPO)的底物及现色剂，根据白细胞对MP0的反应分类。中性细胞MP0 为强阳性，嗜酸性细胞阳性更强，单核细胞为弱阳性，淋巴细胞性，嗜碱性细胞亦为阴性，故综合光散射和细胞化学染色的特点，在电脑显示屏上可得到类似流式细胞仪的二维或三维图像一一不同颜色的散点图．并可打出分类结果。由于嗜碱性细胞不含此酶，不能被检测．

　　血细胞分析仪试剂的选用

　　血细胞分析仪的测定原理大多为电阻法，因此其所用细胞稀释试剂应为导电性良好的电解质液体。同时也要考虑细胞的收缩与扩大问题，为了不使细胞扩大到破裂，液体应为等渗或高渗溶液。溶血剂要考虑用什么表面活性剂成分来溶解红细胞，并使对环境污染最小，且能有效保护白细胞。清洁剂要考虑用那一种清洁剂清洗血细胞分析仪管道，且腐蚀管道可能最小。查阅、累积仪器测定RBC,WBC,PLT的各种试剂配方，并归类，这样容易找出3种试剂的各自关系和内在联系。运用你能找到的分析仪器和检测手段，测定你单位的血细胞分析仪原装试剂成分。稀释液：K+,Na+,Cl-,Ca2+,Mg2+,P,HCO3-等的含量，PH值，渗透压等。溶血剂：K+,Na+,Cl-,Ca2+,Mg2+,P,HCO3-,Br,NH3,SO32-等的含量，PH值,渗透压,测定出溶血剂溶解红细胞的Hb光谱吸收曲线。清洁剂：K+,Na+,Cl-,Ca2+,Mg2+,P,HCO3-,Br,NH3,SO32-等的含量，PH值,渗透压等.

　　1.2.1 试剂配制根据上面步骤的分析,和累积的试剂配方资料,推算出稀释液的主要的缓冲体系和浓度并配给适当的电解质成分,使配出的试剂在PH,渗透压、导电性等方面与原装稀释液非常相近，而后调入适当的防腐剂。对于溶血剂要判断出表面活性剂的种类(可通过色谱仪或溶解红细胞的Hb吸收曲线帮助判断),并通过试验获得表面活性剂的浓度.清洁剂用配制好的稀释液加入适量的相关表面活性剂或成品洗涤剂构成,要考虑对分析仪管道和感应器的腐蚀情况.